三聚氰胺的检测方法
2016/3/23 14:05:29点击：
三聚氰胺(melamine)简称三胺，学名三氨三嗪，别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺，分子式：C3N6H6、 C3N3(NH2)3
分子量：126.12，是一种重要的氮杂环有机化工原料，
物理性能：白色结晶粉末，无毒，无味，
相对密度：1570kg/m3
熔点 ：在常压下，354℃分解，升华温度：300℃。
溶解性：能溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶；微溶于水、乙醇；不溶于乙醚、苯和四氯化碳。水溶液呈弱碱性。
化学性能：三聚氰胺显弱碱性，能够与各种酸反应生成三聚氰胺盐。在强酸或强碱液中，三聚氰胺发生水解，胺基逐步被羟基取代，生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸。三聚氰胺与醛类反应生成加成化合物。其中三聚氰胺与甲醛水溶液的反应是最重要的
研究表明，三聚氰胺的在水中的溶解度非常低，尤其是常温和冷水状况下，溶解于水中的三聚氰胺很快结晶出来，这也是三聚氰胺生产中通过急冷方式分离三聚氰胺的工作原理。钟金国（2003）(川化，2003：3)研究了三聚氰胺母液中的溶解度曲线，发现40摄氏度以下，三聚氰胺的溶解度低于0.9%，随温度升高，其在水中溶解度增大（任保收等，2003化工学报 54（7）:1001-1003）。温度℃ 40 50 60 70 80 90 97 100 110溶解度% 0.9 1.2 1.8 2.3 3.3 4.2 5.0 6.4 7.1因此，在用水相进行三聚氰胺提取时，一定要注意提取温度、样品中三聚氰胺的含量和样品量。
目前三聚氰胺的检测方法分为浊度法（GB9567-1997, 目测或浊度计，尚杰峰等，2005，化工标准计量质量2005-01）、升华法、重量法（GB9567-1988）、0.5 mol/L硫酸电位滴定法（袁立勇等2004）、HPLC（吴明礼和陈彩红，2005宁夏石油化工；熊文莉，2005，川化20054）、 HPLC-MS（FDA，SGS）、 GC-MS(FDA)和ELISA试剂盒法(Beacon, USA)。 不同的测定方法采用不同的三聚氰胺提取方法和使用不同的样品量。
样品制备
宠物食品萃取方法（稀释倍数：100）
1. 均质样品至布丁状。
2. 称取2g样品加入10mL 60%甲醇/水溶液，并剧烈振荡。
3. 超声萃取1分钟。
4. 漩涡混合1分钟，然后静置5分钟，使样品分层。
5. 3000 g 室温离心5分钟。
6. 用玻璃纤维滤纸过滤上清液，并将萃取液收集于一干净试管中。
7. 用样品稀释液将滤液20倍稀释（如：0.1mL滤液+1.9mL 10%甲醇/20mMPBS）
8. 移取150 ul 进行分析。
注意：用此方法测定了8个添加有15ppm三聚氰胺的猫粮（非要求召回），回收率范围为75%-117%。
本方法只可作为样品筛选方法，不可作为最终确认方法。
小麦面筋蛋白萃取方法：（稀释倍数：200）
1.称取1g样品加入10mL 60%甲醇/水溶液，并剧烈振荡。
2.超声萃取1分钟。然后漩涡混合1分钟，然后静置5分钟，使样品分层
3.3000 g 室温离心5分钟。
4.用玻璃纤维滤纸过滤上清液，并将萃取液收集于一干净试管中。
9. 用样品稀释液将滤液20倍稀释（如：0.1mL滤液+1.9mL 10%甲醇/20mMPBS）
10. 移取150 ul 进行分析。
需要注意的是，在高浓度情况下，三聚氰胺在水或甲醇中的溶解度非常低，及时能在高温下提取出来，一旦恢复到室温，又会沉淀离析出来。因此需要更高溶解度的试剂。例如二甲亚砜和三氯乙酸（1% w/v）.
分子量：126.12，是一种重要的氮杂环有机化工原料，
物理性能：白色结晶粉末，无毒，无味，
相对密度：1570kg/m3
熔点 ：在常压下，354℃分解，升华温度：300℃。
溶解性：能溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶；微溶于水、乙醇；不溶于乙醚、苯和四氯化碳。水溶液呈弱碱性。
化学性能：三聚氰胺显弱碱性，能够与各种酸反应生成三聚氰胺盐。在强酸或强碱液中，三聚氰胺发生水解，胺基逐步被羟基取代，生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸。三聚氰胺与醛类反应生成加成化合物。其中三聚氰胺与甲醛水溶液的反应是最重要的
研究表明，三聚氰胺的在水中的溶解度非常低，尤其是常温和冷水状况下，溶解于水中的三聚氰胺很快结晶出来，这也是三聚氰胺生产中通过急冷方式分离三聚氰胺的工作原理。钟金国（2003）(川化，2003：3)研究了三聚氰胺母液中的溶解度曲线，发现40摄氏度以下，三聚氰胺的溶解度低于0.9%，随温度升高，其在水中溶解度增大（任保收等，2003化工学报 54（7）:1001-1003）。温度℃ 40 50 60 70 80 90 97 100 110溶解度% 0.9 1.2 1.8 2.3 3.3 4.2 5.0 6.4 7.1因此，在用水相进行三聚氰胺提取时，一定要注意提取温度、样品中三聚氰胺的含量和样品量。
目前三聚氰胺的检测方法分为浊度法（GB9567-1997, 目测或浊度计，尚杰峰等，2005，化工标准计量质量2005-01）、升华法、重量法（GB9567-1988）、0.5 mol/L硫酸电位滴定法（袁立勇等2004）、HPLC（吴明礼和陈彩红，2005宁夏石油化工；熊文莉，2005，川化20054）、 HPLC-MS（FDA，SGS）、 GC-MS(FDA)和ELISA试剂盒法(Beacon, USA)。 不同的测定方法采用不同的三聚氰胺提取方法和使用不同的样品量。
样品制备
宠物食品萃取方法（稀释倍数：100）
1. 均质样品至布丁状。
2. 称取2g样品加入10mL 60%甲醇/水溶液，并剧烈振荡。
3. 超声萃取1分钟。
4. 漩涡混合1分钟，然后静置5分钟，使样品分层。
5. 3000 g 室温离心5分钟。
6. 用玻璃纤维滤纸过滤上清液，并将萃取液收集于一干净试管中。
7. 用样品稀释液将滤液20倍稀释（如：0.1mL滤液+1.9mL 10%甲醇/20mMPBS）
8. 移取150 ul 进行分析。
注意：用此方法测定了8个添加有15ppm三聚氰胺的猫粮（非要求召回），回收率范围为75%-117%。
本方法只可作为样品筛选方法，不可作为最终确认方法。
小麦面筋蛋白萃取方法：（稀释倍数：200）
1.称取1g样品加入10mL 60%甲醇/水溶液，并剧烈振荡。
2.超声萃取1分钟。然后漩涡混合1分钟，然后静置5分钟，使样品分层
3.3000 g 室温离心5分钟。
4.用玻璃纤维滤纸过滤上清液，并将萃取液收集于一干净试管中。
9. 用样品稀释液将滤液20倍稀释（如：0.1mL滤液+1.9mL 10%甲醇/20mMPBS）
10. 移取150 ul 进行分析。
需要注意的是，在高浓度情况下，三聚氰胺在水或甲醇中的溶解度非常低，及时能在高温下提取出来，一旦恢复到室温，又会沉淀离析出来。因此需要更高溶解度的试剂。例如二甲亚砜和三氯乙酸（1% w/v）.
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