鸡新城疫抗体试剂盒

【产品名称】

通用名：鸡新城疫病毒IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名：Diagnostic Kit for chicken Antibodies to Newcastle Disease Virus (ELISA)

【包装规格】 96T×1/盒

【预期用途】 

      鸡新城疫是由新城疫病毒（Newcastle Disease Virus，NDV）引起的一种高度接触性传染病，又称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟。主要特征是呼吸困难、便稀、神经紊乱、粘膜和浆膜出血。

     本试剂盒适用于鸡血清中新城疫病毒特异性抗体的检测，可用于鸡新城疫疫苗免疫效果评价。

【原    理】

      本试剂盒系由预包被新城疫病毒（NDV）抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测鸡血清或血浆中新城疫病毒特异性抗体。实验时，在酶标板中加入对照血清和稀释的待检血清，经温育后，若样品中含有新城疫病毒的特异性抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有特异性抗体。

【试剂盒组成】

序号	名称	规格（96T×1）
1.	酶标板	96T×1
2.	酶标记物  (红盖)	11ml×1
3.	样品稀释液 (黄盖)	50ml×1
4.	20X浓缩洗涤液	40ml×1
5.	底物液A  (白盖)	6ml×1
6.	底物液B  (黑盖)	6ml×1
7.	终止液  (黄盖)	6ml×1
8.	阳性对照  (红盖)	0.5 ml×1
9.	阴性对照  (绿盖)	0.5 ml×1
10.	盖板膜	1张
11.	说明书	1份

【储存及有效期】 

 于2～8℃避光保存，有效期为12个月。包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。

【适用仪器】 

 含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。

【样品准备】

1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。

2.用样品稀释液将待检血清按100倍稀释（如2μl血清加入198μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。

3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。

【检验方法】

1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条，设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

3.空白对照孔加样品稀释液100μl；阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。

4.混匀，置37℃反应30分钟。

5.扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。

6.每孔加酶标记物100μl（空白孔除外）。置37℃反应30分钟。

7.洗涤，同步骤5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。

9.每孔加终止液50μl，混匀，用空白孔调零，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值）。

【参考值】 实验正常的情况下，阴性对照≤0.10，阳性对照≥0.6。

【检验结果的解释】

1.C.O（临界值）=0.13+阴性对照孔均值（阴性对照孔均值低于0.07时以0.07计算）；

2.样品A值≥C.O为阳性；样品A值＜C.O为阴性。

【试验方法的局限性】

 该试验仅作为定性检测鸡血清或血浆中新城疫病毒IgG抗体，根据A值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。

【注意事项】

1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。

2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。

3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。

4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。

5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。

6.用于检测的样品应保持新鲜。

7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

8.不同批号试剂组分不得混用。

【储  存】

 原包装应储存于2～8℃保鲜冷藏，切勿冷冻。

【有效期】

 有效期12个月;生产日期、有效期、生产批号见外包装。