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氯霉素试剂盒
- 产品品牌快捷康生物
- 产品型号kjkB001B
【产品简介】
氯霉素是一种广谱抗生素，具有很好的抗菌效果，常用于畜牧业生产中，然而，氯霉素会造成人的再生障碍性贫血，而且诱发浓度还没有确定，所以目前已经禁止在动物及食品中使用氯霉素。
氯霉素快速检测试剂盒具有方便、快速、灵敏等特点，适用于大批量样品快速检测。
【测定原理】
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物氯霉素和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗氯霉素抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物氯霉素的含量成负相关，与标准曲线比较可得出相应残留物氯霉素的含量。
【试剂盒技术指标】
规 格：96孔/盒
灵 敏 度： 0.05ppb
检测时间： 45min
样本检测下限：
水产品、动物组织……………………… 0.05ppb
蜂蜜……………………………………… 0.05ppb
参考标准GB/T 20756-2006 检测下限为0.1ppb
样本回收率：
组织…………………………………………90%±15%
蜂蜜…………………………………………85%±15%
交叉反应率
氯霉素……………………………………………… 100%
甲砜霉素…………………………………………… < 0.1%
氟甲砜霉素…………………………………………< 0.1%
【试剂盒组成】
1、 微量测试孔：1×96孔板（12条×8孔）
2、 标准液X6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb
3、 酶标记物 7ml………………………红色帽
4、 抗体工作液 7ml…………………… 绿色帽
5、 底物 A 液 7ml…………………… 棕色帽
6、 底物 B 液 7 ml…………………… 黑色帽
7、 终 止 液 7 ml…………………… 黄色帽
8、 20X浓缩洗涤液 40ml………………白色帽
9、 2X浓缩复溶液 50ml………………蓝色帽
具备的仪器：微孔酶标仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）
微量移液器：单道20μl-200μl，100μl-1000μl、多道250μl
试 剂：氢氧化钠、乙酸乙酯、正己烷、磷酸氢二钾、浓HCl
【实验前溶液配制】
配液1、将2X浓缩复溶液用去离子水按照1：1稀释（1 份浓缩复溶液+1份去离子水）用于样本的复溶。
配液2、将40ml浓缩洗涤液（20倍浓缩）用去离子水按照 1：19稀释（1份浓缩洗涤液+19份去离子水），或按所需用量配制洗涤液。
配液3、 0.1MK2HPO4 称11.4g K2HPO4·3H2O加去离子水溶解定容至500ml。
配液4、1M HCl溶液取8.6ml浓HCl加去离子水定溶至100ml。
配液5、1M NaOH溶液取4gNaOH加去离子水定容至100ml。
【样本前处理方法】
样本处理前须知
处理任何样本时，都必须注意：
（a）本试剂盒所检测的组织样本包括：动物组织、禽类和水产组织。eg:鸡、鸭、猪、牛、羊、兔、鱼、虾等。
（b）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
（c）实验前须检查各种实验器具是否干净，必要时对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。
样本前处理步骤：
样本的处理方法：
（a）水产、组织、蜂蜜 (单一做氯霉素检测时使用的前处理方法）
1、 用均质器均质组织样本；
2、 称3±0.05g样本于离心管中，先加入3ml去离子水充分混匀再加入6ml乙酸乙酯，振荡5min，室温4000r/min以上，离心10min；
3、 取出4ml上层液体在氮气流50-60℃水浴中干燥；
4、 加入1 ml正己烷溶解干燥的残留物，再加1ml稀释后的复溶液强烈振荡混合30s，室温4000r/min以上离心5min。
5、 取50 μl下层相用于分析。
样本稀释倍数：0.5
(b) 水产、组织、蜂蜜(氯霉素和硝基呋喃类四项检测时使用的五合一前处理方法）
1、 取2±0.05g均质样本样本，加入 4ml的去离子水，0.5ml1M HCl和100μl衍生化试剂，充分振荡。
2、 置于37℃恒温箱孵育过夜（大约16h）或56℃水浴中孵育2h；
3、 分别加入5ml 0.1M K2HPO4， 0.4 ml 1M NaOH和5ml乙酸乙酯，充分振荡2min；
4、 在室温下（20-25℃）4000r/min以上离心10min。
5、 取出2.5ml的乙酸乙酯到另一洁净容器中于50℃氮气/空气吹干。
6、 用1ml正己烷溶解干燥物，用1ml已稀释好的复溶液充分混合30s；在室温下（20-25℃）4000r/min以上离心10min。
7、 取50μl下层用于分析。
样本稀释倍数：1
(备注：使用该五合一前处理方法检测氯霉素，因存在一定的干扰；样本检测下限为0.3ppb）。
【酶标免疫分析程序】
1、 从4℃冷藏环境中取出所需试剂，置室温（20-25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、 取出需要数量的微孔及框架，将不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3、 编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
4、 加标准品/样本 50μl/孔到各自的微孔中，加入酶标记物50μl/孔,然后加入抗体50μl/孔，用盖板膜封板，轻轻震荡混匀。25℃环境中反应30min。
5、 取出将孔内液体甩干，用洗液250μl/孔洗板4-5次，每次间隔15-30秒，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。
6、 显色：每孔加入底物A液50μl，再加底物B液50μl，轻轻振荡混匀，25℃环境中避光显色15min。
7、 测定：每孔加入终止液50μl，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，在5min内读完数据），测定每孔OD值。
【结果判定】
结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含氯霉素成反比。
1、 粗略判定：
用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ppb)。假设样本1的吸光度值为0.250，样本2的吸光度值为0.720，标准液吸光度值分别是：0ppb为1.610；0.05ppb为1.380；0.15ppb为1.100；0.45ppb为0.620；1.35ppb为0.289；4.05ppb为0.108。则样本1的浓度范围是1.35ppb-4.05ppb； 样本2的浓度范围是0.15 ppb-0.45 ppb。乘以其对应的稀释倍数即为样本中氯霉素实际浓度。
2、 定量分析：
（1）百分吸光率计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准（0标准）的吸光度值，再乘以100%，即
|
百分吸光度值（%）＝ |
B |
×100% |
|
B0 |
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml标准溶液的平均吸光度值
（2）标准曲线的绘制与计算
以标准品百分吸光率为纵坐标，以氯霉素标准品浓度（ng/ml）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中氯霉素实际浓度。若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（欢迎来电索取）
3、标准曲线：
B/B0 (%)
0.05 0.15 0.45 1.35 4.05
CAP(ppb) [μg/kg]
图1： 氯霉素检测试剂盒的回归曲线
4、再现性：
%CV
CAP (ppb) [μg/kg]
图2：氯霉素检测试剂盒的精密度
由多个不同的实验结果确定了精密度，图2显示出氯霉素检测试剂盒的精密度情况，获得的标准吸收值的变异系数（%CV）对相应氯霉素浓度作曲线，可以看到在全部范围内变异系数如此之低，可以得到很好的再现性。
【 注意事项】
1、 使用前将所有试剂温度回升至室温20-25℃。试剂及标本没有回到室温（20-25℃）会导致所有标准的OD值偏低。
2、 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、 混合要均匀，否则会出现重复性不好的现象。
4、 反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
5、 不要使用过了有效日期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引起灵敏度、OD值的变化。不要交换使用不同批号的盒中试剂。
6、 不用的微孔板放进自封袋密封；标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7、 显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位（A450nm< 0.5 ）时，表示试剂可能变质。
8、 该试剂盒最佳反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
【储存】
原包装应储存于2～8℃保鲜冷藏，切勿冷冻。
【有效期】
有效期12个月;生产日期、有效期、生产批号见外包装。
