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苯乙醇胺试剂盒
- 产品品牌快捷康生物
- 产品型号kjkB0065B
【产品简介】
苯乙醇胺A又称“克伦巴胺”，用作瘦肉精。被农业部第1519号公告列为“禁止在和动物饮水中使用的物质”。目前检测方法主要是应用高效液相色谱-串联质谱法；因其仪器操作繁琐，不利于大规模样本快速筛查；不宜基层推广。
本公司研发的苯乙醇胺A快速检测试剂盒具有方便、快速、灵敏等特点，适用于动物组织（猪肉）、尿样、饲料等大批量样品中苯乙醇胺A的残留量快速检测。
【测定原理】
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测猪肉等样本中的苯乙醇胺A，在微孔条上预包被上偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的，样本中的苯乙醇胺A和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗苯乙醇胺A抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样品中的苯乙醇胺A含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出苯乙醇胺A含量。
【试剂盒技术指标】
规 格：96孔/盒
灵 敏 度： 0.1ppb
检测时间： 75min
样本检测下限：
尿 样 ………………………………… 0.1ppb
组 织 ………………………………… 0.2ppb
饲 料 …… …………………………… 4ppb
交叉反应率：
苯乙醇胺A（Salbutamol ）………………… 100%
克伦特罗（Clenbuterol）………………… <0.1%
莱克多巴胺（Ractopamine）……………… <0.1%
多巴酚丁胺（dobutamine）……………… <0.1%
样本回收率：
尿 样 ……………………… 95%±10%
组 织 ……………………… 85%±15%
饲 料 ……………………… 85%±15%
【试剂盒组成】
1、 微量测试孔：1×96孔板（12条×8孔）
2、 标准溶液X6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb
3、 苯乙醇胺A高标准溶液（1ml/瓶）100 ppb
4、 酶标记物 12ml…………………………红色帽
5、 抗体工作液 7ml……………………… 绿色帽
6、 底物A液 7ml ……………………棕色帽
7、 底物B液 7ml ……………………黑色帽
8、 终 止 液 7ml ……………………黄色帽
9、 20X浓缩洗涤液40 ml ………………白色帽
10、 2X浓缩复溶液 50ml…………………蓝色帽
【 所用仪器、试剂】
具备的仪器：微孔酶标仪、氮气吹干装置、打印机、均质器 、振荡器、离心机、恒温箱、天平（感量0.01g）、刻度移液管
微量移液器：单道20μl-200μl、100μl-1000μl、多道 250μl
试 剂： 浓HCl、甲醇、
【实验前溶液配制】
配液1、将2X浓缩复溶液用去离子水按照1：1稀释（1 份浓缩复溶液+1份去离子水）用于样本的复溶。
配液2、将40ml浓缩洗涤液（20倍浓缩）用去离子水按照 1：19稀释（1份浓缩洗涤液+19份去离子水），或按所需用量配制洗涤液。
配液3、 0.1M HCl 溶液取0.86ml浓HCl加水定溶至100ml。
配液4、样品提取液溶液取1ml 0.1M盐酸加到99ml甲醇中。
【样本前处理步骤】
样本处理前须知
处理任何样本时，都必须注意：
（1）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
（2）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。
（a）尿样本的处理方法（样本稀释倍数：1）
取50μl清亮尿样直接测定（如果尿样浑浊一定要过滤或离心10min，4000r/min，直至得到清亮尿样），暂不使用的样本应冷冻保存。
（b）组织样本的处理方法（样本稀释倍数：2）
1、 称取2 ±0.05g的组织，加入4ml样品提取液，振荡2min,室温4000r/min以上离心10min。
2、 取上清2ml，于50℃氮气或空气吹干。
3、 加1 ml正己烷溶解干燥的残留物，再加1ml稀释后的复溶液强烈振荡混合30s，室温4000r/min以上离心5min。
4、 取50μl进行分析。
（C）饲料样品的处理方法（样本稀释倍数：40）
1. 称1.0±0.05g研碎的饲料样品，加入4ml样品提取液，放振荡器上振荡2min；室温 4000r/min以上离心10min；
2. 取出上清液50ul与450ul稀释好的复溶液混合30s。
3. 取50ul上清进行分析。
【酶标免疫分析程序】
1、 使用前将试剂盒置于室温（20-25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、 取出需要数量的酶标板微孔条插入框架中，将不用的微孔条放入自封袋，保存于2-8℃不要冷冻；
3、 编号：将样品和标准品对应微孔按序编号，每个样品和标准品均需做2孔平行，并记录标准孔和样品孔所在的位置；
4、 配液：将40ml浓缩洗涤液（20倍浓缩）用去离子水按照1：19稀释（1份浓缩洗涤液+19份去离子水），或按所需用量配制洗
涤液。
5、 往酶标板微孔中加标准溶液或样品液50μl/孔，然后加入苯乙醇胺A抗体工作液50μl/孔，用盖板膜封板，25℃环境中反应
30min。
6、 倒出孔中液体，将酶标板倒置在吸水纸上拍打，去除孔中液体。加入250μl/孔洗涤液，15-30s后倒出孔中液体，用吸水纸拍
干，如此重复操作共洗板5次。
7、 酶标记物：加入酶标记物100μl/孔，用盖板膜封板，25℃环境中反应30 min。取出酶标板，如前述洗板5次；
8、 显色：每孔加入底物A液50μl，再加底物B液50μl，轻轻振荡混匀，25℃环境中避光显色15min。
9、 测定：每孔加入终止液50μl，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测），测定每孔吸光度值
（OD值）。
【结果判定】
结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含苯乙醇胺A量成负相关。
1、定性判定：
用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ng/ml)。例如样本1的吸光度值为0.311，样本2的吸光度值为0.715，标准品吸光度值分别是： 0ppb为1.642；0.1ppb为1.200；0.3ppb为0.780；0.9ppb为0.454； 2.7ppb为0.236；8.1ppb为0.142。则样本1的浓度范围是0.9ppb-2.7ppb，样本2的浓度范围是0.3ppb-0.9ppb。乘以其对应的稀释倍数即为样本中苯乙醇胺A的实际浓度。
2、定量分析：
（1）百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准（0标准）的吸光度值，再乘以100%，即
|
百分吸光度值（%）＝ |
B |
×100% |
|
B0 |
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml标准溶液的平均吸光度值
（2）标准曲线的绘制与计算
以标准品百分吸光率为纵坐标，以苯乙醇胺A标准品浓度（ng/ml）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中苯乙醇胺A的实际浓度。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（欢迎来电索取）
3、标准曲线：
B/B0 (%)
苯乙醇胺A(ppb) [μg/kg]
图1：苯乙醇胺A检测试剂盒的回归曲线
4、再现性：
%CV
苯乙醇胺A(ppb) [μg/kg]
图2：苯乙醇胺A检测试剂盒的精密度
由多个不同的实验结果确定了精密度，图2显示出苯乙醇胺A检测试剂盒的精密度情况，获得的标准吸收值的变异系数（%CV）对相应苯乙醇胺A浓度作曲线，可以看到在全部范围内变异系数如此之低，可以得到很好的再现性。
【注意事项】
1、 使用前将所有试剂温度回升至室温20-25℃。试剂及标本没有回到室温（20-25℃）会导致所有标准的OD值偏低。
2、 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行
下一步操作。
3、 混合要均匀，否则会出现重复性不好的现象。
4、 反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
5、 不要使用过了有效日期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引起灵敏度、OD值的变化。不要交换使用不同批号的盒中试剂。
6、 不用的微孔板放进自封袋密封；标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7、 显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位（A450nm< 0.5 ）时，表示试剂可能变质。
8、 该试剂盒最佳反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
【储存】
原包装应储存于2～8℃保鲜冷藏，切勿冷冻。
【有效期】
有效期12个月;生产日期、有效期、生产批号见外包装。
