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氧氟沙星试剂盒

更新：2015/1/19 15:45:33点击：

产品品牌快捷康生物
产品型号kjkB0056B

产品介绍

【原理】

试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物氧氟沙星和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗氧氟沙星抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留氧氟沙星的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出相应残留物氧氟沙星类药物的含量。

【试剂盒技术指标】

规格：96孔/盒

灵敏度： 1ppb

检测时间： 45min

样本定量检测下限：

组织……………………………………… 1ppb

蜂蜜………………………………………2ppb

血清………………………………………2ppb

样本回收率

组织…………………………………80±15%

血清…………………………………80±15%

蜂蜜 ……………………………… 75±15%

氧氟沙星反应率

氧氟沙星（OFL）……………………100％

【试剂盒组成】

1、微量测试孔：每条8孔，一板12条

2、标准液×6瓶：（1ml/瓶） 0ppb、1ppb、3 ppb、9ppb、27ppb、81ppb

3、酶标抗体工作液 7 ml………………………………… 红色帽

4、底物A液 7ml……………………………………棕色帽

5、底物B液　 7ml…………………………………… 黑色帽

6、终止液 7ml……………………………………黄色帽

7、 20X浓缩洗涤液40 ml ……………………………… 白色帽

8、 2X浓缩复溶液 50 ml …………………………………蓝色帽

【所用仪器、试剂】

具备的仪器：微孔酶标仪、打印机、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）

微量移液器：单道20μl-200μl、100μl-1000μl，多道250μl

试剂：浓盐酸、二氯甲烷、正己烷、乙腈、肝素钠Na₂HPO₄·12H₂O、NaH₂PO₄·2H₂O、

【实验前溶液配制】

配液1、0.1M HCL溶液860μl浓盐酸加去离子水100ml溶解。

配液2、乙腈-0.1MHCL溶液 V_乙腈：V_0.1M_–HCL＝84：16

配液3、乙腈-二氯甲烷混合溶液V_乙腈-V_二氯甲烷= 1 : 4

配液4、pH7.2 0.05M PB缓冲液12.9gNa₂HPO₄·12H₂O+2.175gNaH₂PO₄·2H₂O 加去离子水1L溶解。

配液5、pH7.2 0.02MPB缓冲液 5.16gNa₂HPO₄·12H₂O+0.87gNaH₂PO₄·2H₂O 加去离子水1L溶解。

配液6、用去离子水将2X浓缩复溶液按1：1稀释（1份浓缩复溶液+1份去离子水）用于样本复溶。

配液7：将40ml浓缩洗涤液（20倍浓缩）用去离子水按照1：19稀释（1份浓缩洗涤液+19份去离子水），或按所需用量配制洗涤液。

【样本前处理步骤】

样本前处理须知

处理任何样本时，都必须注意：

（a）本试剂盒所检测的组织样本包括：动物组织、禽类和水产组织。eg:鸡、鸭、牛、兔、鱼、虾等。

（b）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。

（c）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。

样本前处理方法：

（a）组织样本（鸡肉/肝、猪肉/肝、虾、鱼等）

1、称2.0±0.05g 均质的组织样本于50ml离心管中；

2、加入乙腈-二氯甲烷混合溶液8ml，振荡5min，4000r/min以上，15℃离心10min；

3、取4ml上层清澈有机相至干燥溶器中，56℃氮气吹干/旋转蒸发至干；

4、用1ml稀释后的复溶液溶解干燥的残留物，加入正己烷1ml混合30s，4000r/min以上，15℃离心5min；

5、去除上层取下层50μl液体用于分析。

样本稀释倍数：1

（b） 组织低检测限处理方法

1、称取2.0±0.05g均质过的组织样本于50ml离心管中；加入4ml 0.02M PB缓冲液，充分振荡2min，于15℃，4000r/min以上速度离心10min

2、取50μl液体与450μl稀释后的复溶液

3、取50μl液体用于分析。

样本稀释倍数：20倍

（c）血清样本的处理

1、用加有肝素钠（20-30单位/ml血）的离心管采集血样本（建议采血注射器也用肝素钠润洗），血样本室温静置1h，待析出血浆后4000r/min以上，15℃离心10min，取出血浆1ml；

2、加入乙腈（无水）4ml上下充分混合5min，4000r/min以上，15℃离心10min；

3、移上清至另一离心管中，加入2ml 0.02M PB缓冲液，混匀；

4、加入二氯甲烷5ml，充分混匀5min，4000r/min，15℃离心10min，去上层，取下层有机相到干燥瓶中（清亮无杂质），50℃旋转蒸发至干/氮气吹干；

5、用1ml稀释后的复溶液溶解干燥的残留物，加入正己烷1ml混合30s，4000r/min以上，15℃离心5min；

6、轻吸掉上层和中间白色杂质，取下层相100μl加入100μl稀释后的复溶液，混合30s；

7、取50μl用于分析。

样本稀释倍数：2

（d）蜂蜜

1、取1g蜂蜜，加６ml乙腈-0.1MHCL溶液振荡至蜂蜜全部溶解；

2、加入３ml 0.05M PB缓冲液，加入11ml二氯甲烷，振荡5min，4000r/min以上离心5min；

3、轻吸掉上层，取下层有机相８ml至干燥溶器中，56℃氮气吹干；

4、用1ml稀释后的复溶液溶解干燥的残留物，再加入正己烷1ml混合30s，3000r/min以上，15℃离心5min；

5、去除上层取下层50μl液体用于分析。

稀释倍数：2

【酶标免疫分析程序】

测定前应须知：

1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20-25℃）。

2、使用之后立即将所有试剂放回2-8℃。

3、在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。

4、在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。

操作步骤：

1、将试剂盒从冷藏环境中取出并将所需试剂从试剂盒取出，置室温（20-25℃）平衡30min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

2、按需要取出微孔条及板架，将不用的微孔板重新密封，保存于2-8℃，不要冷冻。

3、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品均需做2孔平行，并记录标准孔的样本孔所在的位置。

4、加标准品/样本50μl /孔，然后加酶标抗体工作液50μl/孔。轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板，25℃环境反应30min。

5、取出用洗涤液按每孔250μl洗板4-5次，每次浸泡15-30秒，拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。

6、显色：每孔加入底物液A液50μl再加B液50μl，轻轻振荡混匀，25℃环境避光显色15min。

7、测定：每孔加入终止液50μl，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测在5min内读完数据），测定吸光度值（OD值）。

【结果判定】

结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与氧氟沙星类药物的含量成负相关。

1、粗略判定

用样本的平均吸光度值与标准品比较即可得出其浓度范围(ng/ml)。假设样本1的吸光度值为0.238，样本2的吸光度值为0.946，标准液吸光度值分别是：0ppb为1.845； 1ppb为1.542；3ppb为1.130； 9ppb为0.635；27ppb为0.326； 81ppb为0.156。则样本1的浓度范围是27ppb-81ppb；样本2的浓度范围是3ppb-9ppb。乘以其对应的稀释倍数即为样本中氧氟沙星类药物的实际浓度。