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苏州快捷康生物技术有限公司

地址:苏州吴中经济开发区田上江路105号15幢302室

销售:0512-81667002

技术:18013110576

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网址:www.kjkbio.cn

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喹乙醇原药试剂盒

更新:2014/12/6 13:07:03点击:
  • 产品品牌快捷康生物
  • 产品型号kjkB0090B
产品介绍

【产品简介】

喹乙醇又称喹酰胺醇,商品名为倍育诺、快育灵,由于喹乙醇有中度至明显的蓄积毒性,对大多数动物有明显的致畸作用,对人也有致畸形,致突变,致癌,因此喹乙醇在美国和欧盟都被禁止用作饲料添加剂。《中国兽药典》(2005 版)明确规定,喹乙醇被禁止用于家禽及水产养殖。本喹乙醇快速检测试剂盒具有方便、快速、灵敏等特点,适用于动物组织(水产、鸡、猪、牛)、饲料等大批量样品中的喹乙醇快速检测。

【测定原理】

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测等样本中的喹乙醇,在微孔条上预包被上偶联抗原,利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的,样本中的喹乙醇和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗喹乙醇抗体,加入酶标记物后,用TMB底物显色,样品中的喹乙醇含量与样品的吸光度值呈反比,与标准曲线比较即可得出喹乙醇含量。

【试剂盒技术指标】  

       格:96/

度: 0.05ppb

检测时间: 75min

样本检测下限:

组    织………………………………15ppb

饲    料………………………………30ppb

交叉反应率

喹乙醇……………………………… 100%

卡巴多………………………………﹤0.1%

回收率

组    织………………………………80%±15%

饲    料………………………………70%±15%

试剂盒组成  

1、     微量测试孔:1×96孔板(12条×8孔)

2、     1ppm标准品浓缩液1瓶:   1ml/瓶

3、     酶标记物  12ml…………………红色帽

4、     抗体工作液 7ml…………………绿色帽

5、     底物A液   7 ml…………………白色帽

6、     底物B液   7 ml…………………黑色帽

7、     终止液        7 ml…………………黄色帽

8、    20X浓缩洗涤液  40 ml…………透明帽

9、 5X浓缩复溶液      50 ml…………蓝色帽

所用仪器、试剂  

具备的仪器:微孔酶标仪、氮气吹干装置、打印机、均质器 、振荡器、离心机、恒温箱、天平(感量0.01g)、刻度移液管

微量移液器:单道20μl-200μl、100μl-1000μl、多道250μl

试           剂:甲醇、正己烷、去离子水(蒸馏水)

样本前处理步骤

样本处理前须知

处理任何样本时,都必须注意:

1、实验中必须使用一次性吸头,在吸取不同的试剂时要更换吸头。

2、实验之前须检查各种实验器具是否干净,必要时可对实验器具进行清洁,以避免污染干扰实验结果。

样本前处理需配制:

配液1、将5X浓缩复溶液用去离子水按照1:4稀释(1份浓缩复溶液+4份去离子水)用于样品稀释和标准应用液的配制。

配液2、样品提取液配制

              取1ml甲醇与9ml去离子水混匀。( 1份甲醇+9份去离子水)

a)组织(猪肝、猪肉、鱼、虾等)样本的处理方法

1、称1±0.05g均质后组织样本于50ml离心管中,加入5ml样品提取液充分混合30s,混匀,放置56度水浴10min;振荡2min;室温

     4000r/min以上离心10min。

2、取出上清液1ml于离心管中,加入1 ml正己烷充分混合30s;室温4000r/min以上离心5min。

3、取50 μl下层溶液与样品稀释液950ul 充分混合30s取50μl进行分析。

样本稀释倍数:100

b饲料样品的处理方法

1、将饲料样品研碎,称1.0±0.05g研碎的饲料样品,加入10ml样品提取液配制,充分混合30s,放置56度水浴10min,剧烈震荡2min,;室温4000r/min以上离心10min。

2、取出上清液50ul与样本稀释液950ul 充分混合30s

3、取50ul上清进行分析。

        样本稀释倍数:200

酶标免疫分析程序

1、将所需试剂从冷藏环境中取出,置室温(20-25℃平衡30min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

2、配制标准液

   制备喹乙醇标准应用液:

     取一定量的1ppm标准品浓缩液,用样品稀释液并混合均匀,现配现用。

标准液6:配制4.05ppb---4ul标准品浓缩液(1ppm)加980ul样品稀释液混匀;

标准液5:配制1.35ppb---300ul标准液6加600ul样品稀释液混匀;    

标准液4:配制0.45ppb ----300ul标准液5加600ul样品稀释液混匀;    

标准液3:配制0.15ppb ----300ul标准液4加600ul样品稀释液混匀;     

标准液2:配制0.05ppb ----300ul标准液3加600ul样品稀释液混匀;     

标准液1:配制0 ppb----直接用样品稀释液;

3、按需要取出微孔条及板架,将不用的微孔放入自封袋,保存于2-8

4、配液:将40ml浓缩洗涤液(20倍浓缩)用去离子水按照1:19稀释(1份浓缩洗涤液+19份去离子水)或按所需用量配制洗涤液。

5、编号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样品和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。

6、加标准品/样本50μl/孔到各自的微孔中,再加入50μl/孔的抗体工作液,用盖板膜盖板,轻轻振荡混匀,37℃环境反应30min 。

7、取出微孔板,甩出孔内液体,用洗涤液按250μl /孔洗板4-5次,每次浸泡15-30秒,用吸水纸拍干(拍干后未清除的气泡可用干净

     的吸头刺破)。

8、每孔加入酶标记物100μl/孔,用盖板膜盖板后,37℃ 环境中反应30min。取出酶标板,如前述洗板5次。

9、显色:先加入底物液A液50μl/孔,再加入底物B液50μl/孔,轻轻振荡混匀,37℃环境中避光显色反应15min。

10、测定:每孔加入终止液50μl,轻轻振荡混匀,设定酶标仪于450nm处(建议用双波长450/630nm检测,在5min内读完数据),

       测定吸光度值(OD值)

结果判定

结果判定有两种方法,粗略判定可用第1种方法,定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含喹乙醇的含量成负相关。

1、  粗略判定:

用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ppb)。假设样本1的吸光度值为0.250,样本2的吸光度值为0.720,标准液吸光度值分别是:0ppb为1.610;0.05ppb为1.380;0.15ppb为1.100;0.45ppb为0.620;1.35ppb为0.289;4.05ppb为0.108。则样本1的浓度范围是1.35ppb-4.05ppb; 样本2的浓度范围是0.15 ppb-0.45 ppb。乘以其对应的稀释倍数即为样本中喹乙醇实际浓度。

2、定量分析:

所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值(B)除以第一个标准(0标准)的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。

百分吸光度值(%)=

B

×100%

B0

B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值

B00ng/ml标准溶液的平均吸光度值

以标准品百分吸光率为纵坐标,以喹乙醇标准品浓度(ng/ml)的半对数为横坐标,绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓度,乘以其对应的稀释倍数即为样本中喹乙醇实际浓度。

若利用试剂盒专业分析软件进行计算,更便于大量样品的准确、快速分析。

3、标准准曲线:

B/B0 (%)

喹乙醇原药试剂盒回归曲线

0.05     0.15      0.45       1.35      4.05

Olaquindox (ppb) [μg/kg]

            图1:喹乙醇检测试剂盒的回归曲线

4、再现性:

    %CV

喹乙醇原药试剂盒精密度

Olaquindox (ppb) [μg/kg]

      图2:喹乙醇检测试剂盒的精密度

由多个不同的实验结果确定了精密度,图2显示出喹乙醇检测试剂盒的精密度情况,获得的标准吸收值的变异系数(%CV)对相应喹乙醇浓度作曲线,可以看到在全部范围内变异系数如此之低,可以得到很好的再现性。

注意事项

1、使用前将所有试剂温度回升至室温20-25℃。试剂及标本没有回到室温(20-25℃)会导致所有标准的OD值偏低。

2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会伴随着出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下

     一步操作。

3、 混合要均匀,否则会出现重复性不好的现象。

4、 反应终止液为2M硫酸,避免接触皮肤。

5、 不要使用过了有效日期的试剂盒,稀释或搀杂使用会引起灵敏度、OD值的变化。不要交换使用不同批号的盒中试剂。

6、 不用的微孔板放进自封袋密封;标准物质和无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。

7、 显色液若有任何颜色表明变质,应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位(A450nm< 0.5 )时,表示试剂可能变质。

8、 该试剂盒最佳反应温度为37℃,温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。

【储存】

 原包装应储存于2~8℃保鲜冷藏,切勿冷冻。

【有效期】

 有效期12个月;生产日期、有效期、生产批号见外包装。

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